Ang genomic sequence sa kadaghanan sa mga virus nahibal-an.Ang mga pagsusi sa nucleic acid nga mubu nga mga bahin sa DNA nga gilaraw aron mag-hybrid sa komplementaryong viral nga DNA o mga bahin sa RNA.Ang polymerase chain reaction (PCR) kay mas episyente nga teknik para sa viral detection.Ang taas nga throughput diagnostic nga mga pamaagi naugmad bag-o lang.
A. Nucleic acid hybridization nga teknik
Ang nucleic acid hybridization, kasagaran naglakip sa Southern blotting(Southern) ug Northern blotting(Northern), usa ka paspas nga pagpalambo sa bag-ong teknik sa virus diagnostic field.Ang katarungan sa hybridization assay mao ang paggamit sa mugbo nga mga bahin sa DNA (gitawag nga "probe") nga gidesinyo sa pag-hybrid sa komplementaryong viral nga DNA o RNA nga mga bahin.Pinaagi sa pagpainit o alkaline nga pagtambal, ang double-stranded nga target nga DNA o RNA gibulag ngadto sa usa ka strand ug dayon immobilized sa solidong suporta.Pagkahuman niana, ang pagsusi gidugang ug gi-hybrid sa target nga DNA o RNA.Ingon nga ang probe gimarkahan og isotope o non-radioactive nuclide, ang target nga DNA o RNA mahimong makit-an pinaagi sa autoradiography o pinaagi sa biotin-avidin system.Tungod kay ang kadaghanan sa mga viral genome gi-clone ug gisunod-sunod, mahimo kini nga mahibal-an gamit ang piho nga mga han-ay sa virus ingon nga mga pagsusi sa specimen.Sa pagkakaron, ang mga pamaagi sa hybridization naglakip sa: dot blot , in situ hybridization sa mga selula , DNA blotting(DNA) (Southern blot) ug RNA blotting(RNA) (Northern blot).
B.PCR Technology
Sa bag-ohay nga mga tuig, usa ka serye sa mga in vitro nucleic acid amplification techniques ang naugmad base sa PCR, aron sulayan ang mga insensitive o uncultivable nga mga virus.Ang PCR usa ka pamaagi nga makahimo og espesipikong DNA sequence pinaagi sa in vitro polymerase reaction.Ang proseso sa PCR naglakip sa usa ka thermal cycle sa tulo ka mga lakang: denaturation , annealing , ug extension Sa taas nga temperatura (93 ℃ ~ 95 ℃), ang double-stranded DNA gibulag ngadto sa duha ka single DNA strands;unya sa ubos nga temperatura (37 ℃ ~ 60 ℃), duha ka synthesized nucleotide primers anneal sa complementary DNA bahin;samtang sa tukma nga temperatura alang sa Taq enzyme (72 ℃), ang synthesis sa bag-ong DNA chain magsugod gikan sa primer 3'end gamit ang complementary DNA isip templates ug single nucleotides isip materyales.Busa human sa matag siklo, ang usa ka kadena sa DNA mahimong madugangan ngadto sa duha ka kadena.Ang pagsubli niini nga proseso, ang matag DNA chain nga gi-synthesize sa usa ka cycle mahimong gamiton isip template sa sunod nga cycle, ug ang gidaghanon sa DNA chain madoble sa matag cycle, nga nagpasabot nga ang produksyon sa PCR gipadako sa 2n log speed.Human sa 25 ngadto sa 30 ka mga siklo, ang produksyon sa PCR mailhan pinaagi sa electrophoresis, ug ang piho nga mga produkto sa DNA mahimong maobserbahan ubos sa UV nga kahayag (254nm).Alang sa kaayohan niini sa pagkaspesipiko, pagkasensitibo, ug kasayon, ang PCR gisagop sa klinikal nga pagdayagnos sa daghang mga impeksyon sa virus sama sa HCV, HIV, CMV, ug HPV.Ingon nga ang PCR sensitibo kaayo, kini makamatikod sa virus DNA sa lebel sa fg, ang operasyon kinahanglan nga himuon nga mabinantayon aron malikayan ang sayup nga positibo.Dugang pa, ang positibo nga resulta sa pagsulay sa nucleic acid wala magpasabot nga adunay buhi nga makatakod nga virus sa sample.
Uban sa halapad nga paggamit sa teknik sa PCR, ang mga bag-ong teknik ug pamaagi gihimo base sa teknik sa PCR alang sa lainlaing katuyoan sa pagsulay.Pananglitan, ang tinuod nga oras nga quantitative PCR makamatikod sa viral load;in situ PCR gigamit sa pag-ila sa impeksyon sa virus sa tissue o mga selula;Ang nested PCR makadugang sa specificity sa PCR.Taliwala kanila, ang tinuod nga oras nga quantitative PCR mas paspas nga naugmad.Daghang bag-ong mga teknik, sama sa TaqMan hydrolysis probe, hybridization probe, ug molecular beacon probe, gihiusa ngadto sa real time quantitative PCR technique, nga kaylap nga gigamit sa clinical research.Gawas sa tukma nga pag-ila sa viral load sa pluwido sa lawas sa mga pasyente, kini nga pamaagi magamit usab sa pag-detect sa drug-tolerant nga mutant.Busa, ang tinuod nga panahon nga quantitative PCR kay gigamit sa curative effect evaluation ug drug tolerance surveillance.
C. High-throughput detection sa viral nucleic acids
Aron matubag ang mga panginahanglan alang sa paspas nga pagdayagnos sa bag-ong mitumaw nga makatakod nga mga sakit, lainlain nga mga pamaagi sa high-throughput detection, sama sa DNA chips (DNA), natukod.Para sa DNA chips, ang mga espisipiko nga probe gi-synthesize ug gilakip sa gagmay nga mga silicon chips sa taas kaayo nga densidad aron maporma ang DNA probe microarray (DNA) nga mahimong hybridized sa sample.Ang signal sa hybridization mahimong mahulagway sa confocal microscope o laser scanner ug maproseso pa sa kompyuter ug makuha ang dako nga data set mahitungod sa lain-laing mga gene.Adunay duha ka matang sa DNA chip.Ang "synthesis chip" mao ang mosunod: ang piho nga oligonucleotides gi-synthesize direkta sa mga chips.Ang lain mao ang DNA pool chip.Ang mga cloned genes o mga produkto sa PCR hapsay nga giimprinta sa slide.Ang bentaha sa teknolohiya sa DNA chip mao ang dungan nga pagkakita sa usa ka dako nga gidaghanon sa mga han-ay sa DNA.Ang pinakabag-o nga bersyon sa pathogen detection chip makaila sa kapin sa 1700 ka mga virus sa tawo sa usa ka higayon.Ang teknolohiya sa DNA chip nakasulbad sa mga problema sa tradisyonal nga nucleic acid hybridization nga mga pamaagi ug adunay lapad kaayo nga aplikasyon sa viral diagnosis ug epidemiological nga pagtuon.
Oras sa pag-post: Dis-23-2020